Proof and thin layer chromatographic separation of phenolic antioxidants

Summary For the stabilisation of fats and oils, especially those of animal origin and the products with high fat content different antioxydants are lately used, from which the most common are the phenolic ones. With regard to their low admissible amount (0.01–0.05%) it is necessary not only for their determination but also for their proof to use suitable and sensitive methods. We have developed the method for the proof of phenolic antioxydants in fats and oils by means of thin layer chromatographic separation on silica gel and polyamide powder. For the separation of gallic acid and its esters the best result was achieved with solvent system containing 20–35% acetic acid in chloroform. At this concentration of acetic acid the differences in R_f values for the homologic sequence are largest. With the suitable arrangement it is possible with this procedure to proof also NDGA, BHA and BHT.Good results were achieved also with the separation of phenolic antioxydants on thin layers with polyamide powder. For the separation of gallic acid and its esters a solvent system containing carbon tetrachlorid and ethanol (7 : 3) was most suitable. Best separation of esters of gallic acid from NDGA and BHA was achieved with a solvent system containing methanol-aceton-water (6 : 1 : 3). For the detection of phenolic antioxydants their nitrosation with succes was used. This detection is very sensitive and suitable for the identification of these substances after their thin layer chromatographic separation.

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Zusammenfassung Zur Stabilisierung von Fetten und Ölen besonders tierischen Ursprungs und von Produkten, die an solchen Fetten reich sind, verwendet man in letzter Zeit in zunehmenden Maße verschiedene Oxydations-Inhibitoren, die größtenteils phenolischer Natur sind. Da die zulässigen Konzentrationen dieser Stoffe niedrig sind (0.01–0.05%), müssen zu ihrer Bestimmung, aber auch zu ihrem Nachweis, geeignete und empfindliche Methoden angewendet werden.Zum Nachweis phenolischer Oxydations-Inhibitoren in Fetten und Ölen wendeten wir einerseits die chromatographische Trennung auf dünner Silikagel-Schicht an, andererseits die Trennung auf einer dünnen Schicht Polyamidpulver. Zur Trennung von Gallussäure und Gallussäure-Ester bewährte sich Chloroform in verschiedenen Verhältnissen mit Essigsäure (am besten in Konzentration von 20–35%). Bei dieser Konzentration der Essigsäure sind die Unterschiede in den Rf-Werten in der homologen Reihe am größten. Durch geeignete Anordnung der Systeme sind auf diese Weise außer den Gallaten auch NDGA, BHA und BHT abzutrennen bzw. nachzuweisen.Gute Ergebnisse wurden auch bei der Trennung dieser Stoffe auf dünnen Polyamid-Schichten erzielt. Zur Trennung der Gallussäure-Ester wurde ein Gemisch von Tetrachlormethan und Äthanol im Verhältnis 7 : 3 verwendet. Zur Trennung der Gallate von NDGH und BHA wählten wir ein Gemisch von Methanol, Aceton und Wasser im Verhältnis 6 : 1 : 3. Zum Nachweis dieser Stoffe bewährte sich deren Nitrosierung. Dieser Nachweis ist hochempfindlich und eignet sich zur Identifikation dieser Stoffe nach deren chromatographischer Abtrennung auf dünner Schicht.

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Résumé A la stabilisation des graisses et des huile surtout d'origine animale, et des produits à haute teneur en ces graisses, on emploie actuellement largement différents antioxydants dont la plupart est de nature phénolique. Vu les concentrations admissibles assez basses de ces substances (0.01–0.05%) il est nécessaire d'appliquer pour leur détermination et même pour les repister, une méthode convenable et sensible.A la démonstration des antioxydants phénoliques dans les graisses et les huiles nous avons appliqué tantôt la séparation chromatographique sur une couche mince de silicagel, tantôt la séparation sur une couche mince de poudre polyamidé. A la séparation de l'acide gallique et des esters d'acide gal., le chloroforme en proportions différentes avec l'acide acétique (la meilleure concentration de 20–35%) nous affirma son épreuve. A cette concentration d'acide acétique il y a des différences plus grandes des valeurs Rf dans la série homologique. Par un arrangement convenable des systèmes il est possible de séparer de cette façon outre des gallates resp. démontrer même NDGA, BHA et BHT.De bon résultats furent atteints aussi pour la séparation de ces substances sur des couches minces de polyamide. Pour la séparation des esters d'acide gallique le mélange de tétrachlore carbonique et d'éthanol en proportion 7 : 3 fut employé. A la séparation des gallates de NDGH et BHA ce fut le mélange de méthanol et d'acétone et d'eau en proportions 6 : 1 : 3. Pour la détection de ces substances la nitrosation qui nous donna la meilleure preuve. Cette détection est très sensible et appropriée à l'identification de ces substances après leur séparation chromatographique sur une couche mince.