羽衣甘蓝ARC1与Exo70A1蛋白相互作用结构域的分析与鉴定

为阐明羽衣甘蓝自交不亲和信号传递因子ARC1与下游底物Exo70A1相互作用的结构域，利用酵母双杂交系统进行检测与分析。将羽衣甘蓝BoARC1、BoARC1-N端（1 ~ 279 aa，含有UND结构域）及BoARC1-C端（280 ~ 663 aa，含有U-box结构域和Arm repeat结构域）的序列分别构建到pGBKT7载体中，获得BD-ARC1、BD-ARC1-N和BD-ARC1-C重组质粒。将羽衣甘蓝BoExo70A1、BoExo70A1-Δ1（1 ~ 85 aa）、Exo70A1-Δ2（1 ~ 270 aa）及Exo70A1-Δ3（271 ~ 638 aa，含有Exo70结构域）的序列分别构建到pGADT7载体中，获得AD-Exo70A1、AD-Exo70A1-Δ1、AD-Exo70A1-Δ2和AD-Exo70A1-Δ3重组质粒。将获得的重组质粒分别共转化到酵母Y187菌株中，在双缺陷（-Leu-Trp）酵母培养基中培养与生长。β-gal显色检测结果表明，共转BD-ARC1-N/BoExo70A1-Δ1或BD-ARC1-N/BoExo70A1-Δ2的酵母在滤纸上显示蓝色，这说明BoARC1的N端与BoExo70A1的N端介导了两者的相互作用。