猪肺炎支原体融合蛋白MHP-P46-P36的表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

利用生物学软件分析猪肺炎支原体P46蛋白和P36蛋白的抗原决定簇，将抗原表位富集区进行串联，表达融合蛋白MHP-P46-P36。以融合蛋白MHP-P46-P36作为包被抗原，优化反应条件建立肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法。结果显示：融合蛋白MHP-P46-P36以可溶性形式高效表达；ELISA检测方法的最适抗原包被质量浓度10 mg/L, 1%BSA封闭60 min,一抗最佳稀释度1∶40且37℃60 min,二抗最佳稀释度1∶4 000且37℃60 min,最适显色时长15 min, cut-off值为D_{450 nm}=0.385;与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪鼻支原体、猪絮状支原体、猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒阳性血清无交叉反应，具有良好的特异性；阴阳性血清的组内和组间变异系数均小于7%,具有较好重复性；52个样品临床样本检测结果显示，建立的ELISA方法与IDEXX猪肺炎支原体抗体检测试剂盒相比，阳性样本的符合率为83.09%。