猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价

旨在利用原核表达系统在大肠杆菌中制备出猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),用改良的镍亲和层析法纯化并在小鼠体内评价其免疫原性。通过PCR方法从发病猪中扩增出PCV2的ORF2序列，对其全长进行密码子优化并交由公司合成重组质粒pET-32a-yCap;以BL21(DE3)为表达菌株，经IPTG诱导表达，利用SDS-PAGE与Western blot对Cap蛋白的表达方式及抗原特异性进行鉴定；利用改良的镍亲和层析法纯化带有His-Tag标签的重组蛋白；利用透射电镜观察所纯化的载体融合蛋白能否形成VLP;用自制的VLP疫苗与PCV2灭活疫苗(ZJ/C株)分别免疫小鼠，利用商业化PCV2 IgG抗体ELISA检测试剂盒评价其免疫原性。结果显示，成功得到PCV2 ORF2序列和重组质粒pET-32a-yCap,重组质粒在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白形式表达，蛋白大小为47 kDa;经镍亲和层析法纯化可得到单一的目的蛋白；重组Cap蛋白能与PCV2多克隆抗体及HRP标记的6*His, His-Tag小鼠单克隆抗体发生特异性结合；经过磷钨酸负染色的蛋白悬液在透射电镜下可观察到大量规则的、直...