| 非洲猪瘟病毒CD2v胞外区蛋白多克隆抗体的制备及其应用 |
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| 引用本文： | 姜文廷,王嘉宾,石雪建,万博,杜永坤,蒋大伟,姬鹏超,张改平.非洲猪瘟病毒CD2v胞外区蛋白多克隆抗体的制备及其应用[J].中国兽医学报,2022(11):2125-2132. |
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| 作者姓名： | 姜文廷 王嘉宾 石雪建 万博 杜永坤 蒋大伟 姬鹏超 张改平 |
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| 作者单位： | 河南农业大学国家动物免疫学国际联合研究中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31941001)；;河南省重点研发与推广专项(科技攻关)资助项目(202102110098)； |
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| 摘 要： | 非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)CD2v蛋白是病毒粒子外层囊膜上的糖蛋白，是介导病毒血细胞吸附和鉴定病毒血清型的关键蛋白，对于ASFV疫苗研发和疫病净化具有重要作用。为制备ASFV CD2v胞外区蛋白多克隆抗体，本研究以NCBI公布的China/2018/AnhuiXCGQ毒株的EP402R基因为研究对象，利用生物信息学软件进行分析，确定蛋白胞外区序列并进行同源性比对，将其进行密码子优化后克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中，构建CD2v胞外区蛋白重组表达质粒His-CD2v-ex-pcDNA3.1(+),转染293 F细胞进行表达。SDS-PAGE和Western blot检测结果显示，重组蛋白在293 F细胞中以分泌形式表达，相对分子质量为63～89 kDa,能够与ASFV阳性血清特异性结合。利用Ni-NTA进行亲和层析纯化，将纯化后的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体，通过Western blot、免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其生物活性，结果显示兔抗ASFV CD2v胞外区蛋白多克隆抗体能够特异性识...
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| 关 键 词： | ASFV CD2v胞外区蛋白 多克隆抗体 |
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