基于非洲猪瘟病毒p30蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立

p30是非洲猪瘟病毒(Africa swine fever virus, ASFV)感染早期表达的结构蛋白，为非洲猪瘟(ASF)早期诊断和抗体监测的重要靶标。为了建立ASFV ELISA抗体检测方法，本试验以重组p30作为检测抗原，通过方阵滴定法优化抗原包被质量浓度、封闭液以及待检血清和酶标抗体的稀释倍数；确立阴、阳性临界值，检测方法的特异性、敏感性和重复性；比较ELISA方法与商品试剂盒检测结果的符合率，并用Western blot对ELISA结果进行了验证。结果显示，ELISA方法的最佳抗原包被质量浓度为1 mg/L,封闭液为5%的脱脂奶粉，待检血清与酶标抗体的稀释倍数分别为1∶100和1∶5 000倍，阴、阳性临界值为0.294。该方法与伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒等抗血清无交叉反应，敏感性高于商品试剂盒，批内和批间重复性试验的平均变异系数分别为4.723%和4.923%。初步应用显示，建立的ELISA方法的血清抗体阳性检出率高于商品试剂盒，两者的总符合率为62.1%。进一步验证表明，建立的ELISA方法与Western blot的结果一致。上述结果表明，建立的...