| 胞内劳森菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 刘昌锦,魏黄思梧,胡换仪,肖童,林敏,刘小兰,边彦超,罗峰,邓舜洲.胞内劳森菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].中国兽医学报,2022(4):680-685. |
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| 作者姓名： | 刘昌锦 魏黄思梧 胡换仪 肖童 林敏 刘小兰 边彦超 罗峰 邓舜洲 |
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| 作者单位： | 1. 江西农业大学动物科学技术学院;2. 江西金伊博生物科技有限公司 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31460666)；;江西省现代农业产业技术体系建设专项基金资助项目(JXARS-03)； |
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| 摘 要： | 为建立用于检测临床粪便样品中胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,L.intracellularis)的TaqMan荧光定量PCR方法，本研究参考GenBank中发表的L.intracellularis PHE/MN1-00株基因组序列设计50对引物，通过SYBR GreenⅠ荧光染料法PCR验证引物的特异性，针对扩增效率最好的特异性上、下游引物合成相应的TaqMan探针，优化反应条件，对其线性范围、敏感性和重复性进行验证，系统的完成了该方法的建立。结果表明，所建立的TaqMan荧光定量PCR方法，特异性强；在靶标核酸为2.95×101～2.95×106拷贝/μL区间线性关系良好，相关系数R2=0.998 1,扩增效率为96.51%;最低检测浓度为5拷贝/μL;批间和批内的CV均小于2%,重复性好。使用普通PCR方法与本方法对2020年10月至2021年2月采自江西地区猪场的373份粪便样品进行检测，L.intracellularis的总检出率分别为21.4%(80/373)和27.6%(103/...
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| 关 键 词： | 胞内劳森菌 TaqMan实时荧光定量PCR 检测 |
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