新生牛睾丸支持细胞的体外成熟与分化

为建立支持细胞体外分化成熟的细胞模型，本试验使用犊牛睾丸支持细胞进行传代培养，观察细胞形态的变化，通过免疫荧光染色分析波形蛋白和ZO-1的表达，通过荧光定量RT-PCR和Western blot检测细胞增殖相关基因(PI3K、Akt)、细胞紧密连接相关基因(ZO-1、Connexin-34)的mRNA和蛋白表达的变化。结果表明，随着传代次数增加，支持细胞的细胞质充分扩展，逐渐趋于成熟状态；波形蛋白和ZO-1在未成熟与成熟的支持细胞都呈阳性；支持细胞成熟分化后，PI3K的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0.05),Akt的mRNA和蛋白表达水平未见明显改变(P>0.05);ZO-1和Connexin-34的mRNA及蛋白表达水平升高，但差异不显著(P>0.05)。体外传代培养能够促进支持细胞的分化成熟。