基于重构NDRV σC 蛋白的间接ELISA抗体检测方法的建立

旨在建立灵敏快速诊断新型鸭呼肠孤病毒(novel duck reovirus, NDRV)抗体的间接ELISA (indirect ELISA,iELISA)方法，为水禽养殖业提供科学有效的检测手段。先前报道σC蛋白为沉淀表达，因此本研究利用大肠杆菌的密码子偏嗜性等规律优化其基因序列进行原核表达，纯化出高纯度的可溶性σC蛋白。采用方阵滴定法确定σC蛋白包被浓度和样品稀释度，初步建立NDRV的iELISA检测方法。分别对84份阳性和180份阴性质控血清进行分析，构建受试者工作特征曲线(ROC),通过Youden指数选择灵敏性和特异性最佳的P值作为阴阳临界值。使用质控阴、阳血清评价试剂盒的批内和批间重复性。用本研究的和实验室先前建立的全病毒包被的iELISA方法同时对质控血清进行检测，比较其符合率。通过方阵滴定法确定各组分条件为σC蛋白包被质量浓度0.5μg/孔、血清稀释度1∶320。构建的ROC曲线下面积为1.00,最佳阴阳临界值为0.076,在此临界值上的灵敏性和特异性均为100%。全病毒包被板和σC蛋白包被板符合率为100%,但前者检测样品的D₄₅₀值偏低，σC...