| 摘 要： | 以GenBank中马泰勒虫(Theileria equi,T.equi)美国WA株基因组序列(XM＿004833042.1)为目标，选取目前公开的所有顶复门原虫泰勒虫属顶膜抗原1(apical membrane antigen 1,AMA1)基因进行本地BLAST比对。针对目的基因片段设计特异性引物后，以T.equi新疆分离株为模板对AMA1目的基因片段进行扩增克隆，并对T.equi AMA1蛋白进行真核表达以及多克隆抗体制备，最后通过间接免疫荧光和Western blot鉴定真核重组蛋白。结果显示，成功扩增出T.equi新疆株AMA1基因，与T.equi美国WA株AMA1基因相比，两者进化关系最为接近，核苷酸和氨基酸同源性分别为76.34%和78.64%。成功在HEK293T细胞中表达AMA1真核重组蛋白，约为55 kDa,将AMA1原核重组蛋白免疫小鼠后，所产生的多克隆抗体效价为1∶819 200。Western blot结果显示，免疫小鼠产生的多克隆抗体可以识别AMA1真核重组蛋白，表明重组蛋白具有较好的抗原性。本试验完成了T.equi AMA1真核重组蛋白的鉴定和多克隆抗体的制...
|
