鉴别布鲁菌A19疫苗株的双重荧光定量PCR方法的建立与应用

为建立一种可以鉴别布鲁菌A19疫苗株和其他布鲁菌的双重荧光定量PCR方法，分别设计特异性扩增布鲁菌BCSP31基因序列和A19疫苗株缺失序列的2套引物探针，对引物和探针浓度进行优化，并对其敏感性、特异性和重复性进行评价。结果表明，用该方法对2种阳性质粒标准品的最低检测限均为10拷贝/μL;该方法扩增A19疫苗株的核酸时只呈现出1条特异性的扩增曲线，扩增其他布鲁菌菌株(包括疫苗株与野毒株)的核酸时，会出现2条特异性的扩增曲线，而非布鲁菌的细菌核酸均未出现特异性的扩增曲线。该方法的批内和批间重复变异系数均小于3%,重复性良好。对122份临床样品的检测结果显示该方法的阳性样品检出率高于套式PCR检测方法和Bruce-Ladder PCR方法，并可对A19疫苗株的核酸进行鉴别。本研究建立的鉴别布鲁菌A19疫苗株的双重荧光定量PCR方法特异性好、灵敏度高、重复性好，可作为临床上进行A19疫苗株鉴别的一种检测方法。