重组猪链球菌2型溶血素的表达及其溶血活性和致炎作用

PCR扩增溶血素(suilysin, SLY)基因，克隆后测序，利用原核表达载体pET-28a及表达宿主菌E.coli BL21(DE3)构建SLY原核表达系统，采用SDS-PAGE检测蛋白表达情况，借助Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白，获得具有序列保守且可溶性的SLY蛋白。显微镜形态学观察显示，质量浓度为0.4 mg/L的SLY在37℃条件下作用2 h可使贴壁hCMEC/D3(人脑微血管内皮细胞)全部死亡。通过分光光度法测定SLY对人红细胞的溶血活性，结果显示1μg SLY可使2.25×10¹⁰个人红细胞完全溶解。Real-time RT-PCR结果显示，SLY处理所致破碎的红细胞上清可使hCMEC/D3细胞炎性因子IL-6和IL-8转录水平分别升高80倍和100倍以上，且该作用效果显著高于超声破碎红细胞的方式。结果表明，SLY具有显著的细胞毒性，其导致红细胞溶血可能是猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)引起机体炎症反应的原动力。