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| 1种植物瞬时表达捻转血矛线虫氨基肽酶基因和Hc23基因方法的建立 | |
| 作者姓名： | 叶莉莎 张挺 廖聪 李婷婷 田振东 胡敏 |
| 作者单位： | 1. 华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室;2. 华中农业大学农业农村部马铃薯生物学与生物技术重点实验室 |
| 摘 要： | 为建立利用植物细胞瞬时表达反刍动物寄生线虫捻转血矛线虫优势抗原的方法，选取了氨基肽酶基因Hc-ap-10和优选抗原分子基因Hc23作为目标基因，将经过密码子优化的Hc-ap-10(AP10op)和Hc23分别插入pH7lic-EGFP表达载体并在N、C两端均添加核定位信号(nuclear localization sequence, NLS),使用电转法将pH7dNLSAP10op和pH7dNLSHc23分别转入GV3101根癌农杆菌中，随后将根癌农杆菌悬液侵染本氏烟草，最后通过荧光显微镜观察目标蛋白定位情况，并提取侵染烟草叶片总蛋白，使用Western blot检测蛋白的表达量。结果显示，成功构建了植物双元表达载体pH7dNLSAP10op和pH7dNLSHc23,荧光显微镜观察发现在目的基因N、C两端添加了核定位信号后的质粒转化根癌农杆菌。该方法外源表达的膜蛋白pH7dNLSAP10op和pH7dNLSHc23都成功表达在本氏烟草叶片的细胞核上，Western blot也成功检测到Hc23和AP... |
| 关 键 词： | 瞬时表达 捻转血矛线虫 氨基肽酶 Hc23基因 核定位信号 根癌农杆菌 本氏烟草 |