| 稳定表达猪CD163受体的MARC-145细胞系的构建 |
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| 引用本文： | 吕静,刘文波,刘畅,任同伟,陈樱,欧阳康,黄伟坚,韦祖樟.稳定表达猪CD163受体的MARC-145细胞系的构建[J].中国兽医学报,2022(3):529-534. |
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| 作者姓名： | 吕静 刘文波 刘畅 任同伟 陈樱 欧阳康 黄伟坚 韦祖樟 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院 |
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| 基金项目： | 广西自然科学基金重点资助项目(2018GXNSFDA281021)；;国家重点研发计划资助项目(2018YFD0500100)； |
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| 摘 要： | 为了构建稳定表达猪CD163(pCD163)受体的MARC-145细胞系，从猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增pCD163基因，将pCD163基因克隆到慢病毒载体pLVX-IRES-mCherry中，获得重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry。将重组质粒pLVX-pCD163-IRES-mCherry与辅助质粒psPAX2、VSVG共转染293T细胞，获得具有感染能力的慢病毒粒子，使用慢病毒感染MARC-145细胞，用嘌呤霉素初步筛选阳性细胞，采用终点稀释法筛选出稳定表达pCD163受体的MARC-145细胞。通过RT-PCR扩增pCD163基因及测序分析表明细胞系基因组中存在pCD163受体编码序列，IFA和Western blot试验验证了pCD163受体蛋白在细胞系中稳定表达。用不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GXNN1396(lineage 8)、GXNN202004a(lineage 1)、GXGG202007(lineage 3)分别感染稳定表达pCD163的MARC-145细胞系与MARC-145细胞，PRR...
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| 关 键 词： | 猪CD163受体 细胞系 慢病毒载体 |
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