| 绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究 |
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| 引用本文： | 安 静,张雪梅,刘晨曦,等. 绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2014, 42(4): 15-21 |
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| 作者姓名： | 安 静 张雪梅 刘晨曦 等 |
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| 作者单位： | 新疆畜牧科学院 生物技术研究中心，新疆维吾尔自治区动物生物技术重点开放实验室，农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室；新疆农业大学 农学院;新疆畜牧科学院 生物技术研究中心，新疆维吾尔自治区动物生物技术重点开放实验室，农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室;新疆畜牧科学院 生物技术研究中心，新疆维吾尔自治区动物生物技术重点开放实验室，农业部草食家畜繁育生物技术重点开放实验室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划（863计划）项目（2011AA100307） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆绵羊IGF-1基因CDS区,构建绵羊IGF-1基因慢病毒表达载体,分析IGF-1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA,通过RT-PCR方法获得IGF-1全长CDS序列,经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接,构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒,并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞,并用重组慢病毒使其感染,建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线,分析过表达IGF-1对绵羊成肌细胞生长的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518bp的IGF-1CDS区序列。成功构建了pLEX-IGF-1载体,其可在绵羊细胞系中进行稳定表达。通过Western blotting检测显示,IGF-1在293T细胞以及绵羊原代成肌细胞中获得表达,细胞生长曲线显示,稳定表达IGF-1的成肌细胞比对照细胞生长速度显著加快(第1天差异显著(P0.05),第2~6天差异极显著(P0.01));细胞周期测定结果显示,稳定表达IGF-1的成肌细胞比对照细胞较早进入S期,且在S期的细胞数目比对照细胞多29.35%。【结论】绵羊IGF-1能够有效促进绵羊成肌细胞的生长。
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| 关 键 词： | 绵羊IGF1基因；慢病毒表达载体；细胞生长曲线 |
| 收稿时间： | 2013-03-28 |
Construction of lentiviral vector of ovine IGF1 gene and its effects on myoblast growth |
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| AN Jing,ZHANG Xue-mei and LIU Chen-xi,et al. Construction of lentiviral vector of ovine IGF1 gene and its effects on myoblast growth[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2014, 42(4): 15-21 |
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| Authors: | AN Jing ZHANG Xue-mei LIU Chen-xi et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | sheep IGF1 gene lentiviral vector cell growth curve |
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