朱砂叶螨几丁质酶TecCht1基因的原核表达与纯化

【目的】朱砂叶螨是世界范围广泛分布的重要经济害螨，害螨防治十分困难。而几丁质酶是昆虫体内几丁质代谢中分解几丁质的关键酶，在更替新旧表皮和降解围食膜中起着重要的作用，几丁质酶是潜在的螨害生物防治靶标。本研究对朱砂叶螨几丁质酶TecCht1进行原核表达和纯化。【方法】克隆朱砂叶螨TecCht1基因的催化结构域，连接到pCold Ⅱ载体上，构建pCold Ⅱ/TecCht1重组表达载体，在大肠杆菌中进行高效表达，采用镍柱纯化目的蛋白，并进行Western Blot检测。【结果】TecCht1在pCold Ⅱ载体上成功高水平表达，确定最佳诱导表达时间为24 h。对TecCht1进行大量表达和纯化，经Western Blot验证，获得纯度较高的目的蛋白。【结论】实现TecCht1体外高效原核表达，获得大量的TecCht1重组蛋白。