| 鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株感染性分子克隆的构建 |
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| 引用本文： | 包晓玮,王笑梅,高宏雷,祁小乐,付朝阳,张厚双,彭志伟. 鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株感染性分子克隆的构建[J]. 中国预防兽医学报, 2006, 28(4): 369-374 |
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| 作者姓名： | 包晓玮 王笑梅 高宏雷 祁小乐 付朝阳 张厚双 彭志伟 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 摘 要： | 本研究以鸡传染性法氏囊病超强毒Gx株(野毒株)基因组为模板,用蛋白酶K法提取病毒基因组核酸dsRNA,在cDNA克隆的5'端上游引入了T7启动子序列,采用Long-accurateRT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了病毒基因组A节段与B节段全长cDNA。序列测定结果表明,基因组A节段全长共3267个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和两个部分重叠的开放阅读框,基因组B节段全长共2843个核苷酸,包括5'及3'端的非编码区和一个开放阅读框。将IBDV-Gx株的A节段全长基因组及B节段全长基因组分别克隆入pMD18-T载体,构建成pMD-A、pMD-B两个带有T7启动子的重组质粒。两个重组质粒线性化后,进行体外转录,然后共电转染于鸡胚成纤维细胞37℃培养72h并传代。收获的细胞传代培养物分别用RT-PCR、间接免疫荧光、蚀斑试验等方法进行鉴定,结果用RT-PCR扩增出了VP3及VP5基因片段,间接免疫荧光检测到了特异性的荧光抗体,蚀斑试验结果表明蚀斑形成单位为3×103PFU/mL。
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| 关 键 词： | 鸡传染性法氏囊病病毒 Gx株全长cDNA,感染性分子克隆 |
| 文章编号： | 1008-0589(2006)04-0369-06 |
| 收稿时间： | 2005-03-15 |
| 修稿时间： | 2005-03-15 |
Construction of infectious clones of very virulent Gx strain of infectious bursal disease virus |
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| BAO Xiao-wei,WANG Xiao-mei,GAO Hong-lei,QI Xiao-le,FU Chao-yang,ZHANG Hou-shuang,PENG Zhi-wei. Construction of infectious clones of very virulent Gx strain of infectious bursal disease virus[J]. Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine, 2006, 28(4): 369-374 |
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| Authors: | BAO Xiao-wei WANG Xiao-mei GAO Hong-lei QI Xiao-le FU Chao-yang ZHANG Hou-shuang PENG Zhi-wei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | infectious bursal disease virus full-length genomic cDNA clone of Gx strain infectious molecular clone |
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