| 锌指核酸酶(ZFN)介导的牛肌肉抑制素基因(MSTN)突变的研究 |
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| 引用本文： | 赵宇航,云亭,李荣凤,李雪玲.锌指核酸酶(ZFN)介导的牛肌肉抑制素基因(MSTN)突变的研究[J].农业生物技术学报,2014,22(10). |
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| 作者姓名： | 赵宇航 云亭 李荣凤 李雪玲 |
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| 作者单位： | 1. 内蒙古大学教育部哺乳动物生殖生物学及生物技术重点实验室,呼和浩特,010021
2. 南京医科大学,南京,210029 |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品中培育重大专项，内蒙古大学高层次人才引进科研项目 |
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| 摘 要： | 肌肉生成抑制素(myostatin,MSTN)是肌肉发育的负调控基因,突变后会引起肌肉的过度发育,在肉用动物育种中有非常重要的价值。本研究利用锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)对牛(Bos taurus)MSTN基因的第二外显子特异性剪切,诱导该基因的突变,从而达到敲除该基因的目的。首先对脂质体介导的双质粒共转染牛成纤维细胞的条件进行优化,获得的共转染效率高达19.27%;之后利用两组ZFNs对牛成纤维细胞进行转染,单细胞通过口吸法移入96孔板,经扩大培养后进行PCR筛选,获得18株MSTN基因突变细胞株,其中包括一株双等位基因敲除的细胞系,两组ZFNs对牛成纤维细胞的突变效率分别为6.05%和3.84%;最后,挑选一株突变细胞系进行体细胞核移植研究,共获得24枚重构胚;将去除透明带的重构胚培养于2i培养液中,获得囊胚来源的类滋养层干细胞,通过PCR和测序检测,证明该细胞系在MSTN基因第二外显子具有与供体细胞相同的突变。结果表明,所合成的两组ZFNs可以在MSTN作用位点引起突变,具有很高的突变效率,而且能获得双等位基因突变的细胞株,获得的细胞株能够用作体细胞核移植的供体细胞。本研究为肉用牛的品质改良和育种工作提供了基础资料。
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| 关 键 词： | 肌肉生成抑制素(MSTN) 转染效率 锌指核酸酶(ZFN) 突变 体细胞核移植 |
Study on the Mutation of Bovine (Bos taurus) Myostatin Gene (MSTN) Using Zinc Finger Nuclease (ZFN) |
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| ZHAO Yu-Hang,YUN Ting,LI Rong-Feng,LI Xue-Ling.Study on the Mutation of Bovine (Bos taurus) Myostatin Gene (MSTN) Using Zinc Finger Nuclease (ZFN)[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2014,22(10). |
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| Authors: | ZHAO Yu-Hang YUN Ting LI Rong-Feng LI Xue-Ling |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Myostatin(MSTN) Transfection efficiency Zinc finger nuclease(ZFN) Mutation Somatic cell nucleus transfer |
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