| 利用微滴数字PCR分析转基因生物外源基因拷贝数 |
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| 引用本文： | 姜羽,胡佳莹,杨立桃. 利用微滴数字PCR分析转基因生物外源基因拷贝数[J]. 农业生物技术学报, 2014, 22(10) |
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| 作者姓名： | 姜羽 胡佳莹 杨立桃 |
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| 作者单位： | 上海交通大学生命科学技术学院,上海,200240 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育重大专项，教育部新世纪优秀人才计划 |
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| 摘 要： | 微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)是一种基于泊松分布原理的核酸分子绝对定量技术,在核酸分子的绝对计数/定量领域具有极大的应用潜力。本研究基于ddPCR平台,以转基因水稻(Oryza sativa)T1c-19和转人乳铁蛋白基因基因山羊(Capra hircus)134为例,建立了转基因生物(genetically modified organisms,GMOs)外源基因拷贝数分析方法,并比较了其与传统的实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Southern blot方法的准确性。实验数据表明,T1c-19的杀虫晶体蛋白基因(insecticidal crystal protein,Cry1C*)在qRT-PCR和ddPCR测定结果比较一致,约为2拷贝,但已报道的Southern blot分析结果为1拷贝;ddPCR对bar基因的分析结果高于qRT-PCR,分别为2.09拷贝和1.51拷贝。转人乳铁蛋白基因(human lactoferrin,HLF)山羊134在qRT-PCR和ddPCR的分析结果基本一致,均测得含有1拷贝的HLF基因。研究结果表明,微滴数字PCR方法是一种经济、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,灵敏度和准确性高,将会在拷贝数分析中广泛应用。
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| 关 键 词： | 微滴数字PCR(ddPCR) 转基因生物(GMOs) 外源基因 拷贝数 |
Estimating the Exogenous Genes Copy Number of Genetically Modified Organisms by Droplet Digital PCR |
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| JIANG Yu,HU Jia-Ying,YANG Li-Tao. Estimating the Exogenous Genes Copy Number of Genetically Modified Organisms by Droplet Digital PCR[J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2014, 22(10) |
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| Authors: | JIANG Yu HU Jia-Ying YANG Li-Tao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Droplet digital PCR(ddPCR) Genetically modified organisms(GMOs) Exogenous gene Copy number |
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