小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达 |
| |
引用本文: | 赵永刚,田晓灵,宋厚辉,王志亮,吴树清.小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达[J].中国动物检疫,2009,26(7):23-25. |
| |
作者姓名: | 赵永刚 田晓灵 宋厚辉 王志亮 吴树清 |
| |
作者单位: | 1. 中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛,266032 2. 中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;内蒙古农业大学动物医学与科学学院,内蒙古呼和浩特010019 3. 内蒙古农业大学动物医学与科学学院,内蒙古呼和浩特,010019 |
| |
摘 要: | 目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRVF基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和West-ern-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达。结论成功表达了PPRVF基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础。
|
关 键 词: | 小反刍兽疫病毒 F基因 原核表达 抗原位点 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
| 点击此处可从《中国动物检疫》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国动物检疫》下载免费的PDF全文 |
|