番茄枯萎病菌RT-PCR检测技术的建立与应用

根据番茄枯萎病病原菌尖孢镰刀菌番茄专化型(Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici,FOL)蛋白激酶基因序列，设计1对番茄枯萎病特异性引物209F/361R，构建番茄枯萎病菌的RT-PCR(real-time PCR)检测体系，并利用该体系定量检测盆栽番茄茎基部病原菌。RT-PCR结果表明该引物只对番茄枯萎病菌有唯一产物吸收峰，对其他供试菌株都未检到荧光信号。利用该引物建立的RT-PCR检测体系线性关系良好，灵敏度为5.76×10³ copies·μL^-1，是普通PCR的10倍。人工接种番茄枯萎病菌定植后7 d即可在茎基部检测到病原菌；田间采集的24个自然发病样本中有16个能够检测到番茄枯萎病菌。基于RT-PCR技术构建的番茄枯萎病菌快速检测方法检测速度快、灵敏度高、特异性强、重现性好，能够为该病的早期诊断和流行监测提供理论依据。