| Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA |
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| 作者姓名： | 吴凯朝 黄诚梅 李杨瑞 杨丽涛 吴建明 |
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| 作者单位： | 1.广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室,南宁530005;中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007;广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁530007;2.广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室,南宁,530007;3.广西大学/广西亚热带生物资源保护和利用重点实验室,南宁530005;中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁530007;4.中国农业科学院甘蔗研究中心/广西农业科学院甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/广西甘蔗遗传改良重点实验室,南宁,530007 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目子项目（2012BAD40B04）;广西自然科学基金创新团队项目（2011GXNSFF018002）;广西自然科学基金项目（2010GXNSFD013034）;广西农业科学院创新团队项目（桂农科2011YT01） |
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| 摘 要： | [目的]建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础.[方法]采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化.[结果]与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95～2.00和2.11～2.44,所获得的总RNA纯度较高.沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11～2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01～1.61),总RNA纯度较高.经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低.以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp.[结论]改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA.
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| 关 键 词： | RNA Trizol试剂法 改良Trizol-异丙醇法 甘蔗 水稻 玉米 |
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