甘蓝黑腐病菌XC_3374基因功能的初步探究

【目的】初步探究XC_3374基因在甘蓝黑腐病菌Xcc8004中的功能，为深入研究甘蓝黑腐病菌Xcc8004中L-天冬酰胺酶的功能奠定基础。【方法】从KEGG数据库内获取XC_3374基因的旁侧序列，通过常规PCR对其进行克隆，同时利用自杀质粒pK18mobSacB通过同源双交换的方法构建了其缺失突变体DM3374并检测其表型。【结果】以引物D3374L-F/D3374R-R扩增，野生型菌株能够扩增出1789 bp的DNA片段，而候选突变体菌株能扩增出1367 bp的片段；以内部引物3374F/3374R扩增，野生型菌株能扩增出332 bp的片段，而候选突变体菌株不能扩增出任何片段，表明目标基因已缺失，缺失突变体DM3374构建成功。平板检测法结果表明，XC_3374基因突变后不影响胞外多糖及胞外酶的合成与分泌。在MMX基本培养基上，突变体菌株能够正常生长，形成的菌落大小与野生型菌株基本相同，表明缺失突变体不是营养缺陷性。游动平板检测结果表明， XC_3374缺失突变体的运动能力比野生型稍强，但差别不明显。采用剪叶法检测缺失突变体的致病性，结果表明，野生型Xcc8004和缺失突变体DM3374 病斑平均长度分别为13.000和11.983 mm，两者致病性无显著差异。【结论】XC_3374基因突变体在胞外多糖、几种胞外酶的合成与分泌、致病性等各种表型与野生型基本一致。