| 摘 要： | 【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1，SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6 mm的卵泡，用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞，进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列，构建了4条干扰载体（shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306）及1条阴性对照载体（shRNA-NC），利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞，通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组，转染shRNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组，不做处理的颗粒细胞为空白对照组，采用CCK-8法检测转染后24，36，48和60 h各组颗粒细胞增殖情况，用流式细胞术检测转染后24，36和48 h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48 h shRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组（Plt;0.05），故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24，36，48和60 h，干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组（Plt;0.05）；转染后24~48 h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低，S期细胞比例显著升高，从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂，促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖，并阻滞细胞周期的进程。
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