RNA干扰技术抑制新家坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽ICP46与绿色荧光蛋白融合基因的表达 |
| |
引用本文: | 夏立群,梁海鹰,张红莲,秦启伟.RNA干扰技术抑制新家坡石斑鱼虹彩病毒感染细胞多肽ICP46与绿色荧光蛋白融合基因的表达[J].水产学报,2010,34(4):611-617. |
| |
作者姓名: | 夏立群 梁海鹰 张红莲 秦启伟 |
| |
作者单位: | 广东海洋大学水产学院,广东海洋大学水产学院,广东海洋大学水产学院,中国科学院南海海洋研究所 |
| |
基金项目: | 国家“八六三”高技术研究发展计划(2006AA09Z411,2006AA100306);国家自然科学基金项目(30930070);广东省自然科学基金项目(06104920) |
| |
摘 要: | 新加坡石斑鱼虹彩病毒(singapore grouper iridovirus,SGIV)是一种严重的能引起全身性疾病的病原体,对石斑鱼养殖造成了重大的经济损失。将含有SGIV感染细胞多肽ICP46(infected cell polypeptides 46)基因的真核表达载体pEGFP-ICP46转染到胖头鲤细胞(fathead minnow cells,FHM)中进行融合表达,用荧光显微镜观察到ICP46-GFP融合蛋白主要分布于FHM细胞的细胞质中。根据SGIV-ICP46的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰SGIV-ICP46的siRNA(siRNA-ICP46),与pEGFP-ICP46共转染到FHM细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点荧光强度的变化。转染后24~48 h,实验细胞(共转染siRNA-ICP46和pEGFP-ICP46)和阳性对照细胞(共转染siRNA-GFP和pEGFP-ICP46)中的荧光微弱,发荧光的细胞数量较阴性对照(共转染siRNA-Negative和pEGFP-ICP46)少70%左右,但其后实验细胞和阳性对照细胞的荧光强度开始增强,在转染后72 h其与阴性对照组已差别不大。说明体外化学合成的siRNA-ICP46转染后24~48 h可有效抑制FHM细胞中外源导入SGIV-ICP46基因的表达。
|
关 键 词: | RNA干扰 绿色荧光蛋白 石斑鱼虹彩病毒 感染细胞多肽ICP46 |
收稿时间: | 2009/11/12 0:00:00 |
修稿时间: | 2009/12/24 0:00:00 |
|
| 点击此处可从《水产学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《水产学报》下载免费的PDF全文 |
|