蓝舌病I型病毒VP5蛋白的表达纯化及免疫原性分析 |
| |
作者姓名: | 陈玉梅 党伟华 刘燕凯 周景明 刘红亮 郭亚楠 张改平 王爱萍 |
| |
基金项目: | 国家重点研发计划项目(2017YFD0502304-4);智汇郑州1125计划 |
| |
摘 要: | 为分析蓝舌病I型病毒(BTV-1)VP5蛋白的免疫原性,本研究构建了载体PET-28a-VP5并转化BL21(DE3),然后进行IPTG诱导表达,以及SDS-PAGE和Western-blot分析。结果显示,重组VP5蛋白相对分子质量约为62 kDa,与预期结果一致。进一步优化条件,发现IPTG为0.2 mmol/L、温度为25 ℃、诱导6 h时,重组蛋白在上清中表达量最高,通过Ni柱纯化获得的重组蛋白纯度约为75%。将纯化后的重组蛋白VP5分别以40 μg/只和20 μg/只免疫Balb/c小鼠,同时设置PBS为阴性对照,对三免后血清进行间接ELISA检测,发现高、低剂量免疫小鼠均能产生针对VP5蛋白的特异性抗体。用灭活BTV-1进行DOT-ELISA检测,发现其能与VP5蛋白免疫的小鼠血清发生特异性反应,说明利用大肠杆菌表达的重组蛋白VP5具有良好的免疫特性,这为进一步开展BTV相关研究奠定了基础。
|
关 键 词: | 蓝舌病1型病毒;VP5蛋白;蛋白表达;蛋白纯化;条件优化;免疫分析 |
|
| 点击此处可从《中国动物检疫》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国动物检疫》下载全文 |