桑花叶型萎缩病相关病毒的 SYBR Green I实时荧光定量 PCR 检测方法

【目的】建立桑花叶型萎缩病相关病毒（Mulberry Mosaic Dwarf associated Virus，MMDaV）的实时荧光定量 PCR 检测方法。【方法】以 MMDaV 保守的外壳蛋白基因为靶基因，设计特异引物，构建外壳蛋白基因序列的阳性质粒，建立阳性质粒的标准曲线，并对 MMDaV 特异引物的灵敏性和特异性进行检测，并使用建立的 MMDaV 实时荧光定量 PCR 检测方法检测广东、广西、海南、重庆、陕西和江西 6 个省区的桑病叶样品。【结果】构建的标准曲线具有良好的扩增效率（97.88%），设计的特异引物可特异的检测到 MMDaV，最低的质粒检测浓度为 8 copies/μL，是普通 PCR 灵敏度的 24 倍，并且 MMDaV 实时荧光定量 PCR 检测方法对 6 个省区的桑病叶样品均有良好的检测结果，检测的 Cq 值在 9.69~26.17 之间。【结论】建立的 MMDaV 实时荧光定量 PCR 检测方法具有高效率、特异性好和灵敏度高等特性，可被应用于寄主体内 MMDaV 的定量检测。