印度柞蚕（Antheraea mylitta）蛋白酶抑制因子的纯化、cDNA克隆及性质

通过硫酸铵沉淀、阴离子交换和凝胶过滤及FPLC层析从印度柞蚕(Antheraea mylitta)5龄幼虫血液中纯化得到米曲霉(Aspergillus oryzae)真菌蛋白酶抑制因子并命名为AmFPI-1。纯化的产物用双向电泳作了分析。SDS-PAGE电泳表明纯化的抑制因子分子量为10．4kDa。测出了该蛋白质N端的15个氨基酸残基序列，并依据这个序列合成了寡聚核苷酸，构建了印度柞蚕全长cDNA文库，用这些寡聚核苷酸和CDS作引物，通过PCR方法扩增了蛋白酶抑制因子的部分cDNA；用PCR扩增出的DNA作探针，筛选cDNA文库，获得了抑制因子cDNA克隆的序列。对序列分析表明：cDNA由543个核苷酸组成，包含一个315bp的ORF。编码一个105氨基酸残基的蛋白质，该序列与Bombyx mori的几个EST相似，N端氨基酸序列尤其与蜡蛾(Galleria mellonella)的诱导型丝氨酸蛋白酶抑制因子(ISPI-1)相似，表明两者存在高度的近缘关系。血液中存在的这种蛋白酶抑制因子可能在蚕体对抗微生物入侵的天然防御体系中扮演重要角色。