| 蜡状芽孢杆菌环糊精糖基转移酶的基因克隆表达·酶学特性及定点突变研究 |
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| 引用本文： | 花敬涵,杨静文,胡雪芹,张洪斌. 蜡状芽孢杆菌环糊精糖基转移酶的基因克隆表达·酶学特性及定点突变研究[J]. 安徽农业科学, 2019, 47(5) |
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| 作者姓名： | 花敬涵 杨静文 胡雪芹 张洪斌 |
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| 作者单位： | 合肥工业大学食品与生物工程学院,安徽合肥,230009;合肥工业大学食品与生物工程学院,安徽合肥,230009;合肥工业大学食品与生物工程学院,安徽合肥,230009;合肥工业大学食品与生物工程学院,安徽合肥,230009 |
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| 摘 要： | 研究克隆、表达了蜡状芽孢杆菌来源的环糊精糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase,EC 2.4.1.19)基因,研究了其酶学性质,并在此基础上构建突变菌株以探究关键氨基酸位点与产物特异性的关系。结果表明,重组CGTase的最大比活力达5 292 U/mL,分子量约为68 kDa,最适温度和pH分别为55℃和8.5;以淀粉为底物催化合成的主要产物是β-环糊精(β-CD);通过序列对比选取了第47位氨基酸(Ala)进行定点突变,构建了A47R、A47M、A47S、A47Y。研究发现活性区域中第47位氨基酸对于产物特异性和产量具有一定的影响,其中亲水性氨基酸更利于CDs(尤其β-CD)的合成,这为酶法合成β-CD的工业应用提供了方法。
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| 关 键 词： | β-环糊精糖基转移酶 克隆 表达 定点突变 |
Cloning,Expression, Enzymatic Properties and Site-directed Mutation of Cyclodextrin Glycosyltransferase from Bacillus cereus |
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