| 大黄鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的克隆、表达及性质 |
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| 引用本文： | 刘海燕,杨汝晴,陈玉磊,张凌晶,孙乐常,刘光明,曹敏杰.大黄鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶的克隆、表达及性质[J].水产学报,2022,46(7):1154-1166. |
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| 作者姓名： | 刘海燕 杨汝晴 陈玉磊 张凌晶 孙乐常 刘光明 曹敏杰 |
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| 作者单位： | 集美大学海洋食品与生物工程学院,集美大学海洋食品与生物工程学院,集美大学海洋食品与生物工程学院,集美大学海洋食品与生物工程学院,集美大学海洋食品与生物工程学院,集美大学海洋食品与生物工程学院,集美大学海洋食品与生物工程学院 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划 (2018YFD0901004)；国家自然科学基金 (31772049) |
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| 摘 要： | 为探究大黄鱼肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶(MBSP)的性质，实验采用生物信息学方法对大黄鱼MBSP进行基因检索与筛选，通过分子克隆得到大黄鱼MBSP编码区全长cDNA并构建毕赤酵母表达系统得到重组蛋白质(Lc-rMBSP)，分析Lc-rMBSP的酶学性质和二级结构并通过同源建模分析Lc-MBSP的三级结构。结果显示，大黄鱼肌原纤维蛋白中存在MBSP，在55°C下活性最高。大黄鱼基因组中注释为类胰蛋白酶的基因有16条，对这些基因与淡水鱼MBSP进行系统进化树分析和多序列比对，得到同源性较高的基因序列(Lc-MBSP)。Lc-MBSP编码区全长735 bp，共编码244个氨基酸残基。通过毕赤酵母重组表达，分离纯化得到分子量约28 ku的重组蛋白质Lc-rMBSP。表达蛋白的最适温度和pH分别为50°C和8.0。圆二色谱分析表明，温度对Lc-rMBSP二级结构具有较大的影响。Lc-rMBSP在较宽的温度范围内(40～60°C)对MHC具有较高的水解活性。Lc-rMBSP的最适底物为Boc-Leu-Lys-Arg-MCA，并且特异性切割羧基侧的精氨酸残基，而不分解赖氨酸残基。通过同源建模得到Lc...
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| 关 键 词： | 大黄鱼 肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 基因克隆 性质分析 圆二色谱 同源建模 |
| 收稿时间： | 2022/3/22 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2022/4/8 0:00:00 |
Molecular cloning, expression and characterization of myofibril-bound serine proteinase from yellow croaker (Larimichthys crocea) |
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| LIU Haiyan,YANG Ruqing,CHEN Yulei,ZHANG Lingjing,SUN Lechang,LIU Guangming,CAO Minjie.Molecular cloning, expression and characterization of myofibril-bound serine proteinase from yellow croaker (Larimichthys crocea)[J].Journal of Fisheries of China,2022,46(7):1154-1166. |
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| Authors: | LIU Haiyan YANG Ruqing CHEN Yulei ZHANG Lingjing SUN Lechang LIU Guangming CAO Minjie |
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| Institution: | College of Marine Food and Biological Engineering,Jimei University,College of Marine Food and Biological Engineering,Jimei University,College of Marine Food and Biological Engineering,Jimei University,College of Marine Food and Biological Engineering,Jimei University,College of Marine Food and Biological Engineering,Jimei University,College of Marine Food and Biological Engineering,Jimei University,College of Marine Food and Biological Engineering,Jimei University |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Larimichthys crocea myofibril-binding serine protease molecular cloning property analysis circular dichroism homology modeling |
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