猪伪狂犬病毒gE基因在大肠杆菌中的表达 |
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作者姓名: | 孙德刚 黄保续 李晓成 |
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作者单位: | 1. 黄岛出入境检验检疫局,山东青岛,266555 2. 中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛,266032 |
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摘 要: | 根据Genebank中伪狂犬病毒Min-A株gE基因序列,设计了一对引物,PCR扩增长度为557bp的gE基因去信号肽后的主要抗原区域(157-714bp),将其克隆进测序载体PGEM-Teasy中,成功构建质粒PGEMTeasy-gE。用BamhI和HindIII将gE基因主要抗原区域从PGEM-Teasy中切出,然后与同样酶处理的原核表达载体PET32A连接,命名为PET-gE。在IPTG的诱导后,经SDS-PAGE电泳发现43ku处出现特异性蛋白条带。经过Western blot分析,表达产物具有很好的免疫原性。该研究成功表达出具有抗原性的目的蛋白,为血清学鉴别诊断方法gE-ELISA的建立打下很好的基础,同时gE-ELISA也能对野毒和疫苗毒进行鉴别。
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关 键 词: | 表达产物 大肠杆菌 基因 主要抗原 原核表达载体 猪伪狂犬病毒 重组质粒 表达系统 抗原性 诊断方法 |
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