| 黄枝油杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化 |
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| 引用本文： | 谢伟玲,柴胜丰,蒋运生,唐健民,邹蓉,韦霄. 黄枝油杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化[J]. 种子, 2016, 0(6): 17-21. DOI: 10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.06.017 |
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| 作者姓名： | 谢伟玲 柴胜丰 蒋运生 唐健民 邹蓉 韦霄 |
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| 作者单位： | 1. 广西喀斯特植物保育与恢复生态学重点实验室,广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所,桂林 541006;广西师范大学生命科学院,桂林 541004;2. 广西喀斯特植物保育与恢复生态学重点实验室,广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所,桂林 541006 |
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| 基金项目： | 广西林业科技项目(桂林科字[2012]第26号)，广西科技攻关项目(桂科能1598025-49)，桂林市科技攻关项目(20130414) |
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| 摘 要： | 先运用正交设计进行初步筛选,再用单因素设计逐一优化对ISSR-PCR扩增效果有影响的Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板DNA、循环次数及退火温度.建立了黄枝油杉的最佳反应体系和程序,即25μL体系中含2.0mmol/L的Mg2+、1.5U Taq DNA聚合酶、0.10mmol/L的dNTP、1.0μmol/L的引物、30ng的模板DNA以及2.5μL10×PCR buffer,其余的用灭菌的ddH2O补够25μL.扩增程序:94℃预变性5min;94℃变性30s,48～56℃(不同的引物,其退火温度不同,根据具体引物而定)退火45s,72℃延伸90s,以上3个步骤循环50次;最后72℃延伸7min;扩增产物放在4℃冰箱中保存.该体系和程序稳定性良好,结果可靠,可用于黄枝油杉遗传多样性分析.
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| 关 键 词： | 黄枝油杉 ISSR-PCR 正交设计 单因素试验 |
Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Keteleeria calcarea Cheng et L.K.Fu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Keteleeria calcarea Cheng et L.K.Fu ISSR-PCR orthogonal design singlefactor test |
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