体外转录法制备西尼罗河热病毒RNA片段 |
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引用本文: | 邹艳丽 赵永刚,张永强,包静月,孙成友,王君玮,李金明,王志亮.体外转录法制备西尼罗河热病毒RNA片段[J].中国动物检疫,2011,28(12):29-31. |
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作者姓名: | 邹艳丽 赵永刚 张永强 包静月 孙成友 王君玮 李金明 王志亮 |
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作者单位: | 中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心,山东青岛,266032 |
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基金项目: | 十一五国家科技支撑计划,青岛市科技发展计划项目 |
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摘 要: | 目的通过体外转录获得西尼罗河热病毒保守区基因的RNA片段,为核酸快速检测方法的建立和改进提供阳性定量标准品。方法设计西尼罗河热病毒基因保守区克隆引物,PCR从合成的基因DNA获得相应片段,连接至质粒PGEM-T-easy上并筛选阳性重组质粒,测序鉴定后酶切线性化,用T7RNA聚合酶进行体外转录,得到固定长度的RNA片段,DNase酶处理后测定浓度,梯度稀释后用RT-PCR验证。结果获得含西尼罗河热病毒靶基因序列的准确定量拷贝数的RNA片段,质量浓度分别为352.6ng/μL,RT-PCR验证均扩增出相应目的条带。结论获得的RNA片段可作为西尼罗河热病毒核酸快速检测方法的阳性定量标准品。
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关 键 词: | 西尼罗河热病毒 T7启动子 体外转录 |
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