| H9亚型禽流感病毒环介导等温扩增检测方法的建立与荧光指示剂的应用 |
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| 引用本文： | 蒋菲,黄书林,徐威,张跃伟,刘金华,吴文学. H9亚型禽流感病毒环介导等温扩增检测方法的建立与荧光指示剂的应用[J]. 农业生物技术学报, 2011, 19(1). DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.01.028 |
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| 作者姓名： | 蒋菲 黄书林 徐威 张跃伟 刘金华 吴文学 |
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| 作者单位： | 中国农业大学动物医学院,北京,100193 |
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| 基金项目： | 农业部重点项目(No.2008-G57); 2009年国家大学生创新性实验计划; 中国农业大学URP计划资助 |
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| 摘 要： | 利用反转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了一种特异、灵敏、便捷的H9亚型禽流感病毒(H9subtype of avian influenza virus,H9-AIV)的检测方法。该方法使用了对应于H9亚型禽流感病毒血凝素(hemagglutinin HA)基因的8个不同区域的6条特异引物,在63℃的等温条件下反应,最低可检测到103拷贝的目的基因重组质粒片段,较RT-PCR方法敏感10倍。通过对15种H亚型禽流感病毒、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的检测表明,该方法具有良好的特异性。在反应体系中使用钙黄绿素与Mn2+的混合溶液作为荧光指示剂可以用于RT-LAMP结果判定,并且其判断结果与浊度判断结果一致。对109份禽咽喉拭子及泄殖腔拭子临床样品进行检测,RT-LAMP与RT-PCR检出阳性样本数分别为61份和46份,表明RT-LAMP方法阳性检出率高于RT-PCR。
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| 关 键 词： | 反转录环介导等温扩增 H9亚型禽流感病毒 RT-PCR 荧光指示剂 |
Detection of H9 avian influenza virus by Loop-mediated Isothermal Amplification and Application of Fluorescent Reagent |
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| Jiang Fei,Huang Shulin,Xu Wei,Zhang Yuewei,Liu Jinhua,Wu Wenxue. Detection of H9 avian influenza virus by Loop-mediated Isothermal Amplification and Application of Fluorescent Reagent[J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2011, 19(1). DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2011.01.028 |
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| Authors: | Jiang Fei Huang Shulin Xu Wei Zhang Yuewei Liu Jinhua Wu Wenxue |
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| Affiliation: | Jiang Fei Huang Shulin Xu Wei Zhang Yuewei Liu Jinhua Wu Wenxue College of Veterinary Medicine,China Agricultural University,Beijing 100193,China |
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