| 棉铃虫中肠钙黏蛋白Cry1A结合区编码基因的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 黄晶晶,常菊花,陈楚芹,沈晋良,沈文飚.棉铃虫中肠钙黏蛋白Cry1A结合区编码基因的原核表达及多克隆抗体制备[J].江苏农业科学,2010(2). |
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| 作者姓名： | 黄晶晶 常菊花 陈楚芹 沈晋良 沈文飚 |
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| 作者单位： | 1. 南京农业大学生命科学学院,江苏南京,210095
2. 南京农业大学植物保护学院,江苏南京,210095
3. 南京农业大学食品科技学院,江苏南京,210095 |
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| 基金项目： | 农业部高毒农药替代试验示范项目[编号:(2005)种植业(植保)函7号] |
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| 摘 要： | 通过RT-PCR扩增出棉铃虫中肠钙黏蛋白毒素结合区编码基因片段Cad-tb,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,并在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,获得融合表达的包涵体,经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用ELISA检测其效价。结果显示,以pET-30a-Cad-tb表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导成功获得分子量为37 ku左右的重组蛋白,单抗-His的Western blot鉴定其正确表达。纯化后的蛋白成功免疫新西兰大白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16 000。
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| 关 键 词： | 棉铃虫 钙黏蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
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