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| 猪圆环病毒2型Cap基因的克隆与原核表达 | |
| 作者单位： | ;1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程与分子育种湖北省重点实验室;2.河南省信阳市浉河区畜牧局 |
| 摘 要： | 利用PCV2鄂州株的基因序列设计特异性引物,分别在上、下游引物中加入Sac I和Hind III酶切位点,扩增出PCV2鄂州株的ORF2基因;将该片段克隆至p ET-28a原核表达载体,经PCR、酶切鉴定,成功构建了阳性重组表达质粒p ET-ORF2。将其转入大肠杆菌Rosetta中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析确定重组蛋白大小为34.5 k D,主要以包涵体的形式表达。优化后确定最佳诱导条件为:37℃,至OD值0.40.6时加入终浓度为1 mmol/L的IPTG,诱导5 h。表达产物经His-tag镍柱纯化后进行Western-blot分析,结果表明表达的重组蛋白能够与PCV2标准阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。 |
| 关 键 词： | 猪圆环病毒2型 Cap基因 克隆 原核表达 |
Cloning and Prokaryotic Expression of Gene Cap in Porcine Circovirus Type 2 |
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| Keywords: | |