绿色荧光蛋白基因原核表达质粒pET32a-AcGFP1的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

 为了构建绿色荧光蛋白AcGFP1基因的原核表达载体pET32a AcGFP1，并诱导使其在大肠杆菌中高效表达，本研究以pIRES AcGFP1质粒为模板，采用PCR技术特异性扩增绿色荧光蛋白AcGFP1基因，通过酶切和连接使其与原核表达载体pET32a（+）构成重组子，经PCR、酶切和测序鉴定后，重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3），用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达绿色荧光蛋白，经15% SDS PAGE鉴定，结果显示：重组质粒pET32a AcGFP1中的AcGFP1序列与Clontech公司的pIRES AcGFP1质粒的AcGFP1序列完全一致，表明本实验已成功构建了含有绿色荧光蛋白基因AcGFP1的原核表达质粒。此外，pET32a AcGFP1转化Rosetta（DE3），经不同浓度的IPTG诱导，SDS PAGE检测均获得高效表达，为今后构建pET32a(+) TAT AcGFP1融合表达载体以及深入研究TAT的细胞膜穿透作用的机制奠定基础。