| 基于粗提物的水稻条纹病毒体外“抓帽”体系 |
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| 引用本文： | 林文忠,吴然,金晶,丘萍,张洁,吴祖建,杜振国. 基于粗提物的水稻条纹病毒体外“抓帽”体系[J]. 中国农业科学, 2020, 53(21): 4440-4448. DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2020.21.012 |
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| 作者姓名： | 林文忠 吴然 金晶 丘萍 张洁 吴祖建 杜振国 |
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| 作者单位： | 福建农林大学植物病毒研究所/闽台作物有害生物生态防控国家重点实验室,福州 350002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31672005);国家自然科学基金(31870150);福建省自然科学基金(2019J01656);福建省自然科学基金(2016J05071) |
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| 摘 要： | 【背景】布尼亚病毒目(Bunyavirales)和正黏病毒科(Orthomyxoviridae)病毒从帽子结构下游10—20个碱基处切割寄主mRNA,以5′端切割产物(帽子序列)作为引物起始自身基因组的转录,生成含一段异源帽子序列的病毒mRNA,这一过程称为"抓帽"。水稻条纹病毒(rice stripe tenuivirus, RSV)是一种布尼亚病毒,其"抓帽"机制还不甚清楚。【目的】研究RSV粗提物能否从溶液中的外源mRNA"抓帽",以建立一种便捷的体外体系,用于解析RSV"抓帽"和转录机制。【方法】以PEG沉淀和超速离心法粗提RSV,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱技术分析粗提物成分。然后取少量粗提液,加入富含珠蛋白(globin)mRNA的兔网织红细胞裂解液(rabbit reticulocyte lysate,RCL)和合适浓度的金属离子配制体外"抓帽"体系。待体外反应结束,提取体系中总RNA,以巢式RT-PCR扩增含珠蛋白-αmRNA帽子序列的RSV mRNA,并对其进行克隆,通过序列分析比较RSV体外"抓帽"与体内"抓帽"的异同。【结果】从100 g感染R...
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| 关 键 词： | 水稻条纹病毒 抓帽机制 体外转录 |
| 收稿时间： | 2020-06-15 |
An in vitro Cap-Snatching System of Rice Stripe Tenuivirus Based on Crude Virion Preparations |
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| LIN WenZhong,WU Ran,JIN Jing,QIU Ping,ZHANG Jie,WU ZuJian,DU ZhenGuo. An in vitro Cap-Snatching System of Rice Stripe Tenuivirus Based on Crude Virion Preparations[J]. Scientia Agricultura Sinica, 2020, 53(21): 4440-4448. DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2020.21.012 |
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| Authors: | LIN WenZhong WU Ran JIN Jing QIU Ping ZHANG Jie WU ZuJian DU ZhenGuo |
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| Affiliation: | Plant Virus Research Institute, Fujian Agriculture and Forestry University/State Key Laboratory of Ecological Pest Control for Fujian and Taiwan Crops, Fuzhou 350002 |
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