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细粒棘球蚴Eg95s基因的串联表达及表达系统优化
引用本文:刘丹,贾红,侯绍华,丁敏,朱鸿飞.细粒棘球蚴Eg95s基因的串联表达及表达系统优化[J].中国畜牧兽医,2009,36(8).
作者姓名:刘丹  贾红  侯绍华  丁敏  朱鸿飞
作者单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学实验室,北京,100081 
摘    要:为研制新型棘球蚴病基因工程疫苗,根据GenBank公布的细粒棘球蚴Eg95基因序列,针对其中一段348 bp高度亲水的优势表位序列设计引物,扩增Eg95s基因,利用同尾酶法基因同向串联方案,获得3拷贝Eg95s串联体.分别用两种表达载体pGEX-6p-1和pET-32a构建重组质粒,转化入3种大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)、Rosseta(DE3)和Orjgami(DE3),对其进行IPTG诱导表达,经免疫印迹分析结果表明,均能正确表达具有免疫原性的Eg95s蛋白.通过重组蛋白的表达量、可溶性、纯化方法等方面的比较,对Eg95s重组表达系统的载体及宿主菌进行了优化,结果表明,3拷贝的串联Eg95s在以pET-32a为表达载体,Rosseta(DE3)为宿主菌的系统中表达最佳.最终获得了表达量高、可溶性好、纯化方便的Eg95s重组蛋白表达系统,为大规模生产棘球蚴病基因工程疫苗提供了科学依据.

关 键 词:串联表达  表达系统  优化

Tandem Expression of Eg95s Gene of Echinococcus granulosus and Optimization of the Expression System
Abstract:
Keywords:Eg95s
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