| 苏云金芽胞杆菌WB5中营养期杀虫蛋白3Aa基因(vip3Aa)的克隆、表达与纯化 |
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| 引用本文： | 陈凡冰,宋飞飞,石鹏,黄志鹏,关雄. 苏云金芽胞杆菌WB5中营养期杀虫蛋白3Aa基因(vip3Aa)的克隆、表达与纯化[J]. 农业生物技术学报, 2014, 0(11) |
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| 作者姓名： | 陈凡冰 宋飞飞 石鹏 黄志鹏 关雄 |
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| 作者单位： | 福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福州,350002 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目，教育厅高校领军人才，福建省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 营养期杀虫蛋白(vegetative insectcidal protein,Vip)是由苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在营养生长指数中期至稳定期期间分泌产生的一类新型杀虫因子,分为Vip1、Vip2和Vip3三种,以Vip3的研究最为深入。Vip3A对鳞翅目(Lepidoptera)害虫具有广谱杀虫活性,具有重要研究意义。本研究以Bt WB5菌株总DNA为模板,采用PCR方法扩增vip3Aa(Gen Bank登录号:AAM22456)全长,将该片段纯化回收后与p MD18-T连接并转入大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α,进行酶切验证和序列测定。将vip3Aa基因片段与经同样酶切的表达载体p Czn1连接,构建重组表达载体p Czn1-vip3Aa,转入大肠杆菌Arctic ExpressTM(DE3),异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)进行诱导表达。SDS-PAGE结果表明,在沉淀和上清中均有约88 k D VIP3Aa蛋白质表达产物;采用Ni亲和树脂对上清中的VIP3Aa融合表达蛋白进行了纯化,获得了纯化蛋白。本研究成功亚克隆了vip3Aa基因,并表达纯化了VIP3Aa蛋白,为后续研究VIP3Aa蛋白在昆虫中肠的作用受体提供了基础资料。
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| 关 键 词： | 苏云金芽胞杆菌 营养期杀虫蛋白Aa基因(vipAa) 克隆与表达 蛋白纯化 |
Cloning,Expression and Purification of Vegetative Insecticidal Protein 3Aa Gene(vip3Aa) from Bacillus thuringiensis WB5 |
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| CHEN Fan-Bing,SONG Fei-Fei,SHI Peng,HUANG Zhi-Peng,GUAN Xiong. Cloning,Expression and Purification of Vegetative Insecticidal Protein 3Aa Gene(vip3Aa) from Bacillus thuringiensis WB5[J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2014, 0(11) |
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| Authors: | CHEN Fan-Bing SONG Fei-Fei SHI Peng HUANG Zhi-Peng GUAN Xiong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bacillus thuringiensis Vegetative insecticidal proteins 3Aa gene(vip3Aa) Cloning and expression Protein purification |
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