马立克氏病病毒多次跨膜蛋白pUL43多克隆抗体的制备及其体外表达分析

为了研究马立克氏病病毒(MDV)pUL43蛋白的表达特征,首先通过同源重组反应构建了表达MDV pUL43蛋白的真核载体,利用生物信息学软件分析MDV pUL43蛋白的跨膜结构、亲水性、疏水性和抗原性,选择抗原性最佳的N端第259～276位合成抗原肽,5次免疫兔后采集血清并通过亲和层析纯化浓缩多克隆抗体,利用斑点杂交对多克隆抗体效价进行检测,利用实时荧光定量(RT-qPCR)检测感染细胞UL43基因m RNA转录本水平,利用间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹对转染或被MDV感染细胞的pUL43蛋白进行检测。结果显示:多克隆抗体与抗原肽的反应效价为1∶100 000;转染细胞内pUL43蛋白呈斑块聚集;814疫苗株或GX20NNM1野毒株感染后UL43基因在mRNA、蛋白水平上具有相似的表达动力学。在感染后12 h检出特异性的pUL43蛋白,其表达量随感染时间延长而增加;特异条带的表观分子量在45～50 ku。研究成功制备了特异性MDV pUL43蛋白多克隆抗体,并分析了MDV pUL43蛋白的体外表达特征,为后续研究其生物学功能奠定了基础。