鸡传染性支气管炎病毒Real-time PCR方法的建立及应用

为建立一种快速定量检测鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的方法,试验针对H120株5′端非编码区保守区域序列设计一对特异性引物,构建重组质粒作为阳性标准品进行SYBR GreenⅠReal-time PCR,建立了定量检测IBV的标准曲线与直线回归方程;同时,应用该方法检测三株IBV毒株在接种SPF鸡胚后不同时间段的病毒含量。结果显示:该方法标准曲线相关系数为1,线性曲线好;最低可检测病毒的浓度为10~1拷贝/μL,是常规PCR方法的100倍;与其它禽源病毒均不发生交叉反应,特异性好;批间和批内重复性试验变异系数均小于1%;病毒含量在接种后36 h达到峰值,且rH120-S/TZ株病毒复制效率高于H120株,rIBTZ株复制效率最低。结果表明,该Real-time PCR方法灵敏度高,特异性和重复性好,可应用于IBV的定量检测。