鸡γ干扰素在酵母中的分泌表达

根据GenBank已发表的鸡γ干扰素（ChIFN-γ）eDNA基因序列设计一对引物，以ConA刺激8h后的鸡全血淋巴细胞提取的总RNA为模板．通过RT—PCR方法克隆出ChIFN-γ基因，将其连接到pMD18-T载体上获得阳性重组质粒。测序结果表明，该ChIFN-γ与GenBank上发表的ChIFN-γ序列的同源性可达99．6％，其含有1个495bp的开放性阅读框架，编码164个氨基酸。通过KpnⅠ和NotⅠ两个酶切位点将该基因插入酵母表达载体（pPICZa—A），并将该重组酵母ChIFN-γ载体线性化，通过电转化使ChIFN-γ基因整合到酵母（X-33）基因组上，经甲醇诱导后，成功表达出ChIFN-γ。利用Western—blotting分析测定表达的ChIFN-γ蛋白的活性。结果表明，本试验得到的重组酵母ChIFN-γ是具有反应原性的蛋白。