单核细胞增生李斯特菌新型内化素lmo0549的分子特征及其表达 |
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作者姓名: | 王立霞 孟庆玲 乔军 郭晶 伍晔晖 才学鹏 蔡扩军 王登峰 |
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作者单位: | 石河子大学动物科技学院,新疆石河子,832003;中国农业科学院兰州兽医研究所,甘肃兰州,730046;乌鲁木齐市动物疾病控制与诊断中心,新疆乌鲁木齐,830063;新疆畜牧科学院兽医研究所,新疆乌鲁木齐,830000 |
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基金项目: | 国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家重点研发计划;乌鲁木齐市科技局渝乌科技合作项目;新疆生产建设兵团中青年科技创新领军人才计划 |
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摘 要: | 应用PCR技术对单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)新型内化素lmo0549基因进行克隆和测序,并对其进行生物信息学分析;通过扩增获得Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区序列,并将其亚克隆至pET-32a(+)表达载体,转入大肠杆菌中用异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-thiogalactoside,简称IPTG)诱导表达,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定重组蛋白的表达形式及其抗原特异性。序列分析结果表明,扩增得到的lmo0549基因全长为2 034 bp,编码677个氨基酸,其信号肽序列是前23个氨基酸,在Lmo0549蛋白氨基酸序列中,从N端到C端分别包括5个富含亮氨酸的重复基序(LRR)、1段PKD重复序列和1个WxL结构域;同时还存在N-联糖基化位点10个、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点14个、蛋白激酶C磷酸化位点15个。同源性分析显示,LM-SB5 lmo0549基因编码的蛋白氨基酸序列与标准株李斯特菌EGD-e,(NC_003210.1)蛋白氨基酸序列的同源性为88.04%,且在单核细胞增生李斯特菌中具有较高的保守性。SDS-PAGE分析显示,表达的Lmo0549蛋白氨基端抗原集中区具有与理论值33.8 ku相符的分子质量;蛋白质印迹法分析表明,重组蛋白Lmo0549与LM阳性血清可发生特异性免疫反应,为进一步探讨Lmo0549在LM侵入宿主细胞的分子作用机制奠定了前期基础。
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关 键 词: | 单核细胞增生李斯特菌 内化素Lmo0549 克隆 分子特征 原核表达 |
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