| H5N1亚型禽流感病毒NA基因在Sf9昆虫细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 张晓东,陶 玲,王汉中.H5N1亚型禽流感病毒NA基因在Sf9昆虫细胞中的表达[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2009,37(7):28-32. |
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| 作者姓名： | 张晓东 陶 玲 王汉中 |
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| 作者单位： | 张晓东,格日勒图(内蒙古农业大学,动物科学与医学学院,内蒙古,呼和浩特,010018);陶玲,王汉中(中国科学院武汉病毒研究所,人畜共患病实验室,湖北,武汉,430071)
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| 摘 要： | 【目的】在Sf9昆虫细胞中表达H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)神经氨酸酶(NA)基因。【方法】用PCR方法克隆H5N1亚型AIVNA基因,定点插入到转移载体pFastBacHTb中,构建重组转移载体pFastBacHTb-NA。将其转化到含有AcBacmid和helper质粒的E.coliDH10B感受态细胞中,与AcBacmid重组,获得rAcBacmid-NA。提取重组的Bacmid,转染处于对数生长期的昆虫Sf9细胞,获得重组杆状病毒vAc-NA。将vAc-NA重新感染处于对数生长期的昆虫Sf9细胞,3~5 d后收集被感染细胞。取转染细胞、感染细胞、破碎感染细胞上清和破碎感染细胞沉淀进行SDS-PAGE和Western-blotting分析。【结果】通过PCR成功地克隆了1 352 bp的H5N1亚型AIV不含信号肽序列的NA基因;pFastBacHTb-NA和rAcBacmid-NA构建成功。AIVNA基因在昆虫Sf9细胞内得到有效表达,表达产物分子质量约为52 ku,且具有免疫原性。【结论】H5N1亚型AIVNA基因在昆虫Sf9细胞中表达成功。
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| 关 键 词： | H5N1亚型禽流感病毒 神经氨酸酶 杆状病毒载体 真核表达 |
| 收稿时间： | 2008/10/17 0:00:00 |
Expression of influenza virus subtype H5N1 neuraminidase gene in Sf9 insect cells |
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| Institution: | ZHANG Xiao-dong1,TAO Ling2,WANG Han-zhong2,GER Le-tu (1.College of Animal Science and Veterinary Medicine,Inner Mongolia Agricultural University,Hohhot,Inner Mongolia 010018,China;2.Wuhan Institute of Virology,Chinese Academy of Science,Wuhan,Hubei 430071,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | H5N1 subtype avian influenza virus neuraminidase baculovirus vector eukaryotic expression |
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