猴STLV病毒gag蛋白在昆虫细胞中的表达

根据已报道的STLV病毒gag蛋白基因(genbank登录号:AY590142),人工合成猴STLV病毒gag基因,通过BamHI和HindIII特异性酶切,将其克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTB,经PCR、酶切及测序鉴定,成功地构建了猴STLV病毒gag基因杆状病毒表达重组质粒pFastHTB-gag。该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、庆大霉素、四环素平板抗性筛选,PCR鉴定,表明获得了转座的杆粒Bacmid-gag。在此基础上,提取Bacmid-gag杆粒,并转染Sf9昆虫细胞,96h后反复冻融细胞,收集上清液,获得杆状病毒,并用来Sf9细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和westernbloting分析表明初步获得了表达的gag蛋白且具有良好的生物活性,大小约为52kD,为下一步以表达的gag蛋白为诊断抗原,替代现阶段以分离的病毒抗原和HTLV相关蛋白作为抗原的猴STLV病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。