盖塔病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定

为制备盖塔病毒(GETV) E2蛋白单克隆抗体，通过大肠埃希菌表达系统表达重组E2蛋白，经过镍柱吸附、切胶纯化，获得E2蛋白，将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠，3次免疫后加强免疫，细胞融合，通过间接免疫荧光筛选阳性杂交瘤细胞，最终筛选出1株针对GETV E2蛋白的阳性杂交瘤细胞9E8,将该杂交瘤细胞注射入小鼠腹腔内生产腹水。经间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验鉴定，该单抗可与GETV发生特异性反应。经IP试验证明，该单抗可识别天然结构的GETVE2蛋白。对E2单抗进行抗原表位鉴定，确定其所识别的多肽序列为⁶⁶KIRYIAGHD⁷⁴。与GenBank上登录的其他GETV毒株序列对比，发现该段序列高度保守。综上，E2单抗9E8免疫学反应特性良好，为研究该病毒提供了有效的免疫学检测工具。