| 鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 陈雨涛,纪晓霞,李帅,伍钢,张源淑.鸭血管紧张素转换酶2(ACE2)双抗体夹心ELISA检测方法的建立与应用[J].扬州大学学报(农业与生命科学版),2023(1):75-85. |
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| 作者姓名： | 陈雨涛 纪晓霞 李帅 伍钢 张源淑 |
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| 作者单位： | 南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(31972640)； |
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| 摘 要： | 为建立鸭血管紧张素转换酶2 (angiotensin converting enzyme 2, ACE2)双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)定量检测方法，首先利用纯化的鸭ACE2重组蛋白，成功制备了兔抗鸭ACE2多克隆抗体，间接ELISA法确定抗体效价为1∶800;然后利用制备的鼠抗鸭ACE2多克隆抗体作为捕获抗体，通过戊二醛二步法对兔抗鸭ACE2多克隆抗体进行HRP标记，并将HRP标记的兔抗鸭ACE2多克隆抗体作为检测抗体，纯化获得的鸭ACE2重组蛋白作为标准品，建立鸭ACE2双抗体夹心ELISA定量检测方法，并对抗体浓度、捕获抗体最适包被条件、孵育条件、封闭条件及显色条件等进行优化；通过Western blot法检测正常白鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织间ACE2表达的变化；利用RT-qPCR方法检测正常鸭与患传染性浆膜炎的病鸭不同组织中ACE2基因的相对表达量。结果表明：所建立的双抗体夹心ELISA方法最低检测浓度为5 ng·mL-1,最佳线性范围为25～1 600 ng·mL
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| 关 键 词： | 鸭 血管紧张素转换酶2 (ACE2) 抗体制备 双抗体夹心酶联免疫吸附试验 定量检测 |
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