丹参转录因子SmWRKY1基因克隆及遗传转化拟南芥

以丹参为试材，提取总RNA和合成cDNA,采用PCR扩增获得丹参转录因子SmWRKY1基因序列，通过生物信息软件及在线工具检测基因编码蛋白质的理化性质及氨基酸多序列比对，构建过表达载体并使用花序侵染法转入拟南芥，研究了转SmWRKY1基因对拟南芥生长性状和生理指标的影响，以期初步探究丹参SmWRKY1转录调控因子的生物学功能。结果表明：SmWRKY1基因全长1 041 bp,编码346个氨基酸，NCBI数据库保守区BLAST分析显示具有典型的“WRKY”DNA结合保守结构域和C₂H₂型锌指结构。编码蛋白分子量为37 310.4 Da,等电点pI为9.77,GRAVY为-0.571,ProtParam分析SmWRKY1属于亲水性蛋白。构建过表达载体pCAMBIA-SmWRKY1,并使用花序侵染法转入拟南芥，经鉴定获得11株转SmWRKY1基因的阳性苗，转基因植株可以使叶片和莲座直径显著变大，叶绿素和可溶性糖含量增加，MDA和脯氨酸含量减少，因此推测丹参SmWRKY1可能是一个与植物基础防御有关的负调控因子，参与植物非生物胁迫反应。