猪IL-6基因在毕赤酵母中的表达及生物活性鉴定

为了快捷、大量地表达猪白细胞介素-6(IL-6)蛋白,试验采用PCR的方法,以含猪IL-6全基因的重组质粒p MD19-T-IL-6为模板扩增猪IL-6成熟蛋白基因,构建真核重组表达载体p PICZαΑ-IL-6,转化毕赤酵母野生株X-33进行分泌表达,并进行表达蛋白的初步处理和活性鉴定。结果表明:SDS-PAGE可检测到预期的蛋白条带,诱导表达24,48,72,96 h后,分泌IL-6蛋白分别占总蛋白的76.1%、83.4%、84.6%、89.6%。第96小时时,猪IL-6表达产物浓度约为0.94 g/L。Western-blot试验证实,重组猪IL-6蛋白与兔抗猪IL-6多克隆抗体发生特异性反应。猪IL-6表达产物浓度为10.5 mg/L时对猪外周血淋巴细胞具有促进增殖作用,浓度为105.0 mg/L时则具有抑制作用。